香港計算器

DNA/RNA 濃度計算器

輸入 A260 吸光度、核酸類型(dsDNA/ssDNA/RNA)、稀釋倍數與光程,即時算出核酸濃度(μg/mL 與 ng/μL),附常見轉換系數對照表。

輸入資料

分光光度計在 260 nm 測得的吸光度(OD₂₆₀),線性範圍一般為 0.1–1.0。
依核酸類型選擇:雙鏈 DNA=50、單鏈 DNA=33、RNA=40(μg/mL per A260)。
量測前把樣品稀釋的倍數(未稀釋填 1)。例如取 10 μL 加 190 μL 水即 DF=20。
比色皿光程,標準石英皿為 1 cm;NanoDrop 微量量測請依機器設定。
cm

計算結果

450μg/mL
450ng/μL

重點速覽:核酸濃度可由紫外線吸光度快速定量:DNA 與 RNA 的鹼基在 260 nm 有最大吸收,吸光度與濃度成正比(Beer–Lambert 定律)。以標準轉換系數 CF 換算即得濃度 C = (A260 / l) × CF × DF,其中 dsDNA 每單位 A260 約 50 μg/mL、ssDNA 約 33、RNA 約 40,l 為光程、DF 為稀釋倍數。

計算公式

核酸濃度:C(μg/mL)= (A260 ÷ l) × CF × DF。

轉換系數 CF:dsDNA=50、ssDNA=33、ssRNA=40(μg/mL per A260)。

μg/mL 與 ng/μL 數值相同(1 μg/mL = 1 ng/μL)。

$$C = \dfrac{A_{260}}{l} \times \mathrm{CF} \times \mathrm{DF}$$

使用說明

  1. 輸入分光光度計在 260 nm 測得的吸光度 A260。
  2. 選擇核酸類型(dsDNA/ssDNA/RNA)以套用對應轉換系數,並輸入稀釋倍數與光程。
  3. 右側即時顯示核酸濃度(μg/mL 及 ng/μL)。

核酸類型與 A260 轉換系數對照

核酸類型與 A260 轉換系數對照
核酸類型轉換系數 CF每 1.0 A260 濃度
雙鏈 DNA(dsDNA)5050 μg/mL
單鏈 DNA(ssDNA)3333 μg/mL
RNA(ssRNA)4040 μg/mL
寡核苷酸依序列而定需用消光系數 ε₂₆₀ 計算

純度可另看 A260/A280 比值:純 DNA 約 1.8、純 RNA 約 2.0,過低代表有蛋白質或酚類污染。

理財情境案例

質體 DNA 定量

抽取質體後取 10 μL 加 190 μL TE 緩衝液(稀釋 20 倍),測得 A260 = 0.45。

C = (0.45 ÷ 1) × 50 × 20 = 450 μg/mL,即 450 ng/μL。

以此濃度即可換算下游反應(如連接、轉染)所需的取樣體積,避免用量不足或過量。

RNA 樣品定量

萃取總 RNA 後未稀釋(DF=1)直接量測,A260 = 0.2、光程 1 cm。

C = (0.2 ÷ 1) × 40 × 1 = 8 μg/mL。

RNA 用 CF=40;若誤用 DNA 的 50 會高估 25% 濃度,故選對核酸類型很重要。

常見問題

為什麼 dsDNA 用 50 而 RNA 用 40?

因為不同核酸的鹼基組成與結構在 260 nm 的莫耳吸光度不同。實驗歸納出經驗系數:1.0 A260 約對應 dsDNA 50 μg/mL、ssDNA 33 μg/mL、RNA 40 μg/mL。用錯系數會系統性高估或低估濃度。

稀釋倍數要怎麼填?

填量測前把樣品稀釋的倍數。例如取 5 μL 樣品加 95 μL 水,總體積放大 20 倍,就填 20;直接量原液則填 1。系統會把稀釋液濃度乘以此倍數還原成原液濃度。

μg/mL 和 ng/μL 為什麼一樣?

因為 1 μg/mL = 1000 ng ÷ 1000 μL = 1 ng/μL,兩者數值完全相同,只是慣用單位不同,分子生物實驗多以 ng/μL 表示。

A260/A280 比值代表什麼?

用來判斷純度:純 DNA 約 1.8、純 RNA 約 2.0。比值明顯偏低表示有蛋白質(280 nm 吸收)或酚類污染,應純化後再定量。本計算器只做濃度換算,純度需另行讀取 A280。

寡核苷酸(引子)可以用這公式嗎?

短寡核苷酸的吸光度會隨序列大幅變化,較準確的做法是用最近鄰模型算出該序列的消光系數 ε₂₆₀ 再換算。本計算器的固定系數適用於一般 dsDNA、ssDNA 與 RNA 樣品。

相關工具

參考資料

內容審核:香港計算器科學團隊。核酸吸光度定量公式與轉換系數參考標準分子生物學教材及香港中學文憑試(DSE)生物科課程。