細胞密度計算器
輸入血球計數板每大方格平均細胞數、稀釋倍數與樣品體積,即時算出細胞密度(cells/mL)與細胞總數,適用於細胞培養與繼代計數。
輸入資料
計算結果
重點速覽:細胞密度(cells per mL)是每毫升細胞懸液所含的細胞數,是細胞培養最基本的定量指標,用於繼代分種、種板密度控制與活力評估。以 Neubauer 血球計數板計數時,單一大方格體積為 0.1 μL(10⁻⁴ mL),因此細胞密度 = 每大方格平均細胞數 × 稀釋倍數 × 10⁴。乘以懸液總體積即得細胞總數。
計算公式
細胞密度:density = 平均細胞數 × 稀釋倍數 × 10⁴(cells/mL)。
10⁴ 來自大方格體積 0.1 μL = 10⁻⁴ mL 的倒數。
細胞總數:total = density × 樣品體積(mL)。
$$\text{density} = \bar{N} \times DF \times 10^{4}$$$$\text{total} = \text{density} \times V$$使用說明
- 在血球計數板數四個角(或指定)大方格的細胞,取平均值填入。
- 填入上樣前的稀釋倍數(如與台盼藍 1:1 混合填 2)與懸液總體積。
- 右側即時顯示細胞密度(cells/mL)與細胞總數。
常見平均細胞數換算密度(稀釋 2 倍)
| 每大方格平均 | 稀釋倍數 | 細胞密度(cells/mL) |
|---|---|---|
| 25 | 2 | 5.0 × 10⁵ |
| 50 | 2 | 1.0 × 10⁶ |
| 85 | 2 | 1.7 × 10⁶ |
| 120 | 2 | 2.4 × 10⁶ |
| 200 | 2 | 4.0 × 10⁶ |
每大方格細胞數建議控制在 20–200 之間;過密應先稀釋再計數,以降低疊加誤差。
理財情境案例
繼代分種計算
與台盼藍 1:1 混合後計數,四角大方格分別數到 80、90、82、88,平均 = 85。
細胞密度 = 85 × 2 × 10⁴ = 1.7 × 10⁶ cells/mL;懸液共 10 mL,總細胞 = 1.7 × 10⁷。
若欲以 3 × 10⁵ cells/well 種 6 孔盤(每孔 2 mL),每孔需 6 × 10⁵ 細胞,取 ≈ 0.35 mL 懸液補足培養液即可。
活力(活細胞率)評估
台盼藍染色後,未染色(活)細胞平均 85、染色(死)細胞平均 5。
活細胞密度 = 85 × 2 × 10⁴ = 1.7 × 10⁶ cells/mL;總細胞平均 90。
細胞活力 = 85 ÷ 90 ≈ 94%,種板時以活細胞密度為準避免高估接種量。
常見問題
為什麼要乘 10⁴?
Neubauer 血球計數板單一大方格(1 mm × 1 mm,蓋玻片下深 0.1 mm)體積為 0.1 μL = 10⁻⁴ mL。要換算成每毫升,需除以此體積,即乘以 10⁴。故密度 = 平均細胞數 × 稀釋倍數 × 10⁴。
應該數幾個大方格?
標準做法是數計數板四個角的大方格(各含 16 小格),取平均值提高代表性。若細胞很密,可只數對角兩格或先稀釋。跨在方格線上的細胞採「數上、數左,不數下、不數右」的一致規則避免重複。
稀釋倍數要怎麼填?
填上樣前的總稀釋倍數。與台盼藍 1:1 混合(各 50 μL)即 2 倍稀釋,填 2;取 10 μL 懸液加 90 μL 稀釋液則填 10。未做任何稀釋填 1。稀釋能讓過密的樣品落在可準確計數的範圍。
細胞總數怎麼算?
細胞總數 = 細胞密度 × 懸液總體積(mL)。例如密度 1.7 × 10⁶ cells/mL、體積 10 mL,總細胞 = 1.7 × 10⁷。這個數字用於規劃可接種的培養瓶數或凍存管數。只想看密度可把體積填 0。
自動細胞計數儀和手動計數板結果一樣嗎?
原理相同(固定體積內計數換算每毫升),自動儀器速度快、重現性高,但對碎片與聚集敏感。手動血球計數板成本低、可肉眼判讀活力,仍是實驗室黃金標準。兩者結果通常一致,差異多來自樣品是否充分混勻與稀釋是否適當。
相關工具
參考資料
內容審核:香港計算器科學團隊。血球計數板換算公式參考標準細胞培養實驗手冊。